【摘要】 为了增强穿透深度，研究团队首次演示了三光子激发光片荧光显微镜。

在过去的二十年里，荧光显微镜领域取得了显著的发展，包括超分辨率和快速体积成像以及许多其他创新。然而，剩下的一个关键挑战是在光的散射限制了光学显微镜的穿透和性能的情况下进行成像。ADRIÀ ESCOBET-MONTALBÁN等人[1]3P显微镜探索在这种特定成像模式下与2P对应物相比的优势。

 

3P显微镜的研究主要集中在以1300 nm和1700 nm波长为中心的成像窗口，使用超短脉冲激光进行。研究团队采用了一种openspim风格的数字扫描光片荧光显微镜，将超短脉冲激光束扩展到由三角波驱动的单轴振镜上。通过调整扫描镜，在样品腔内产生虚拟光片，并使用XYZ线性平移台从上方握住样品并精确定位。荧光通过第二个物镜垂直于照明平面收集，并使用400毫米管镜头聚焦到水冷sCMOS相机上，产生40倍的放大倍率。

 

为了增强穿透深度，研究团队首次演示了三光子激发光片荧光显微镜。他们通过实验和数值模拟展示了使用传播不变贝塞尔光束而非高斯光束在三光子光片显微镜中的潜在优势。这一突破为生物样品的快速体积成像提供了新的可能性。

 

[1]Adrià Escobet-Montalbán, Liu P , Nylk J ,et al.Three-photon light-sheet fluorescence microscopy[J].Cold Spring Harbor Laboratory, 2018(21).DOI:10.1101/323790.

 

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