【摘要】 重要的是，β阻滞素在静息状态下是细胞质的，为了结合GPCRs，需要在受体激动剂激活时转移到质膜上。

βarrestin1和-2（也分别称为arrestin2和-3）是G蛋白偶联受体（GPCR）的适配蛋白，在细胞中发挥三个主要功能：功能脱敏，即G蛋白与受体解偶联；通过笼蛋白包裹的凹坑内化G蛋白偶联受体，形成信号小体。

 

β的逮捕行动引发了很大一部分GPCRs的G蛋白非依赖性信号转导。在过去的15年左右的时间里，人们已经开发了几种方法来量化GPCR-arrestin的相互作用/结合，特别是自从后者在信号转导中的作用被发现以来。

 

这些方法中最简单和最传统的方法之一是免疫共沉淀（co-IP）分析，然后是Western blotting。这种分析也是最可靠的方法之一，因为它不需要对复合体中的任何一个成分进行任何化学修饰（即既不需要受体也不需要arrestin）。因此，它是唯一可以检测和半定量天然GPCRs和天然阻滞剂之间相互作用的方法。

 

当然，这项检测需要注意的是，它的可靠性取决于所用抗体的质量（特异性和敏感性）。在这里，我们描述了一种简单的方案，用于执行这种共IP分析，以获得细胞内激动剂诱导的GPCR-arrestin相互作用的稳态水平的测量。

 

重要的是，β阻滞素在静息状态下是细胞质的，为了结合GPCRs，需要在受体激动剂激活时转移到质膜上。因此，在测试这些适配蛋白对受体的活性时，评估GPCR-βarrestin结合是至关重要的。

 

下面，我们描述了免疫共沉淀（co-IP）的方法，然后是Western blotting（Bonifacino，Dell‘Angelica，&Springer，2001；Mody，Hernandez，&Lymperopoulos，2017）[1,2]，这是一种优雅而可靠的方法，用于在体外或体内通过GPCR法测量βarrestin的激活。

 

[1]Bonifacino, J. S., Dell’ Angelica, E. C., & Springer, T. A. (2001). Immunoprecipitation. Current Protocols in Immunology, 41, 8.3.1–8.3.28

[2]Mody, R., Hernandez, Y., & Lymperopoulos, A. (2017). Assays of adrenal GPCR signaling and regulation: Measuring adrenal β-arrestin activity in vivo through plasma membrane recruitment. Methods in Cell Biology, 142, 79–87

 

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