生物透射电子显微镜-云现场-科学指南针

项目简介

云现场”实验是科学指南针推出的一款黑科技视频网络体验，用户只需要一部电脑或者移动设备，即可在任何时间、任何地点发起或参与测试过程，实现各种信息的实时共享与协作。测试过程实时直连测试仪器屏幕，与测试老师一对一沟通选区拍摄，所见即所得，媲美现场实验。

生物透射云现场分为制样和云现场拍摄两部分，两部分单独计费，制样包括超薄切片及负染色制样。

一、预约云现场注意事项：

1、抽真空时间含在测试总时长内，即从样品进仓开始计时，一般在5min左右

2、测试项目为形貌

3、云视频测试时长1h起约，不同样品拍摄速度不均一，平均下来，拍摄速度一般2个样/小时（仅供参考），需要拍摄高倍并且仔细找特殊形貌的样品一般拍摄速度更慢些，具体请根据实际拍摄要求准确预约时长；

4、最好不要超时，一般情况下，后面会安排其他客户测试，尽量预约足够时间，比如约了 2 小时，最多可测试时间是 2 小时，2 小时后会结束测试，请合理安排时间；如果后面时间没有其它客户，可以适当延长，费用按实际最终测试总时长计算，多退少补；

5、如临时有事需取消预约，请提前 24 小时联系，可以免费取消，如未提前告知，造成机时损失，按预约时间半价收费；

6、在拍摄过程中遇到问题您有权随时叫停测试，最终测试费用会根据实际测试时长多退少补。

结果展示


图1. I和II是纳米材料进入细胞切片局部和放大图；III是材料附着细胞表面的细胞切片图


图2.金黄色葡萄球菌在低于药物MIC作用后细胞壁发生溶解


图3.小球藻细胞形态	图4.斑马鱼组织

样品要求

服务流程：

送样方式：

可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单。

①需要您提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml离心管内，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），可放置于4°C保存，请不要倒弃固定液，一般固定12h后可寄送（务必采用1.5ml离心管寄送）。

②打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。

具体取材及固定方法如下：

1.对于细胞类，10⁶以上的细胞，用细胞刮刀刮下来（不要反复刮取，动作迅速一次性刮取下来），1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，然后放入4°C冰箱保存。

2.对于组织类，新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请立即投入4℃预冷的固定液中，然后放入4°C冰箱固定保存（对于无法下沉的样品，一定要通过抽真空，让样品沉下去）。

3.对于细菌类，吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，弃掉上清液，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，然后放入4°C冰箱保存（固体培养的标本取样时尽可能把培养基削薄一点，块切小）。

其他类型样品前处理可与指南针工作人员沟通！

*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置

下列操作由我们完成：

倒掉固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理20min；最后过度到纯丙酮处理20min。用包埋剂与丙酮的混合液（V/V=1/1）处理样品1h；用包埋剂与丙酮的混合液（V/V=3/1）处理样品3h；纯包埋剂处理样品过夜；将经过渗透处理的样品包埋起来，70℃加热过夜，即得到包埋好的样品。样品在超薄切片机中切片，获得70-90nm的切片，切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5-10min，晾干后即可在透射电镜中观察。

服务周期：

一般为样品接收后的3周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！

交付内容：

每样提供10张拍摄图片（不提供分析服务），如需照片数量超过10张，按照40元/张收费。

结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。

常见问题

1. 2.5%戊二醛固定液如何配置？

市售25%戊二醛水溶液 10ml

0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0） 50ml

蒸馏水加至 100ml

2. 0.2M，pH7.0磷酸缓冲液的配置方法？

A液：Na₂HPO₄·H₂O 31.61g，或者Na₂HPO₄·7H₂O 53.63g，或者Na₂HPO₄·12H₂O 71.64g，加蒸馏水至1000ml

B液：NaH₂PO₄·H₂O 27.6g，或者NaH₂PO₄·2H₂O 31.21g，加蒸馏水至1000ml

0.2M，pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml（合起来是100ml）